برآورد کمی verticillium dahliae در زیتون های آلوده و ارزیابی مقاومت به بیماری با استفاده از تکنیک real-time pcr

پژمردگی ورتیسلیومی یکی از بیماری های مهم زیتون است که باعث تخریب سیستم آوندی و در نهایت مرگ گیاه می شود. استفاده از ارقام مقاوم یکی از موثرترین روش های کنترل بیماری محسوب می شود. دراین بررسی ابتدا از زیتون های آلوده منطقه طارم در استان زنجان نمونه برداری صورت گرفت. پس از ضدعفونی سطحی، قطعات نمونه برداری شده بر روی محیط کشت های عمومی pdaو اختصاصی czapec dox agar دردمایc 24ْ و شرایط تاریکی در انکوباتورکشت داده شدند. پس از جدا سازی قارچ با استفاده از روش های استاندارد تک اسپور کردن عمل خالص سازی در محیط آب آگار انجام گرفت. استخراجdna از ورتیسلیوم رشد یافته بر روی محیط مایع pdb انجام شد و نوع پاتوتیپ قارچ عامل بیماری زا در منطقه با استفاده از تکنیک nested-pcr و آغازگرهای اختصاصی نوعd تعیین گردید. در ادامه نهال های پنج ماهه ارقام زرد (بومی طارم)، آربیکن، آبلونکا و کرونایکی موجود در ایستگاه تحقیقات زیتون طارم برای ارزیابی کمی قارچ عامل بیماری و تعیین میزان حساسیت یا مقاومت آنها نسبت به بیماری با سوسپانسیون107 قارچ عامل بیماری به روش root dip تلقیح گردیدند. تعدادی از قلمه ها به عنوان شاهد در نظر گرفته شدند. استخراجdna از ریشه نهال های تلقیح شده و شاهد که در فواصل زمانی معین نمونه برداری شده بودند انجام گرفت. روند افزایش تدریجی میزان dna قارچ موجود در نهال ها با استفاده از تکنیک real- time pcr و به کارگیری سیستم sybr green همراه با آغازگرهای اختصاصی کمیت سنجی گردید. پس از جداسازی قارچ عامل بیماری از درختان آلوده، نتایج بررسی ها نشان داد که ارقام زرد، آربیکن و آبلونکا با توجه به بالا بودن غلظت dna قارچ در کل dna استخراج شده در فواصل زمانی معین بعد از تلقیح به ترتیب حساسیت بیشتری نسبت به رقم کرونایکی در برابر بیماری دارند و رقم کرونایکی تا حدودی در برابر بیماری مقاوم بود. همچنین نتایج حاصله نشان داد که real-time pcr تکنیک مناسبی برای ارزیابی مقاومت ژنوتیپ های مختلف زیتون نسبت به بیماری پژمردگی ورتیسلیومی است که می تواند در کنار روش های معمول برای غربالگری ارقام مقاوم به بیماری مورد استفاده قرار گیرد.